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( 一 ) 、 檢 測 原 理 細 胞 發 生 凋 亡 或 壞 死 , 其 細 胞 D N A 均 發 生 斷 裂 , 細 胞 內 小 分 子 量 D N A 片 斷 增 加 , 高 分 子 D N A 減 少 , 胞 質 內 出 現 D N A 片 斷 。 但 凋 亡 細 胞 D N A 斷 裂 點 均 有 規 律 的 發 生 在 核 小 體 之 間 , 出 現 1 8 0 - 2 0 0 b p D N A 片 斷 , 而 壞 死 細 胞 的 D N A 斷 裂 點 為 無 特 征 的 雜 亂 片 斷 , 利 用 此 特 征 可 以 確 定 群 體 細 胞 的 死 亡 , 并 可 與 壞 死 細 胞 區 別 。 ( 二 ) 結 果 判 斷 正 常 活 細 胞 D N A 電 泳 出 現 階 梯 狀 ( L A D D E R ) 條 帶 ; 壞 死 細 胞 D N A 電 泳 類 似 血 抹 片 時 的 連 續 性 條 帶 。 三 、 酶 聯 免 疫 吸 附 法 ( E L I S A ) 核 小 體 測 定 凋 亡 細 胞 的 D N A 斷 裂 使 細 胞 質 內 出 現 核 小 體 。 核 小 體 由 組 蛋 白 及 其 伴 隨 的 D N A 片 斷 組 成 , 可 由 E L I S A 法 檢 測 。 ( 一 ) 檢 測 步 驟 1 、 將 凋 亡 細 胞 裂 解 后 高 速 離 心 , 其 上 清 液 中 含 有 核 小 體 ; 2 、 在 微 定 量 板 上 吸 附 組 蛋 白 體 ’ 3 、 加 上 清 夜 使 抗 組 蛋 白 抗 體 與 核 小 體 上 的 組 蛋 白 結 合 ‘ 4 、 加 辣 過 氧 化 物 酶 標 記 的 抗 D N A 抗 體 使 之 與 核 小 體 上 的 D N A 結 合 ’ 4 、 加 酶 的 底 物 , 測 光 吸 收 制 。 ( 二 ) 用 途 該 法 敏 感 性 高 , 可 檢 測 5 * 1 0 0 / m l 個 凋 亡 細 胞 。 可 用 于 人 、 大 鼠 、 小 鼠 的 凋 亡 檢 測 。 四 、 流 式 細 胞 儀 定 量 分 析 ( 一 ) 檢 測 原 理 細 胞 發 生 凋 亡 時 , 其 細 胞 膜 的 通 透 性 也 增 加 , 但 是 其 程 度 介 于 正 常 細 胞 與 壞 死 細 胞 之 間 。 ( 二 ) 應 用 價 值 流 式 細 胞 儀 檢 測 具 有 以 下 特 點 : 1 ) 、 檢 測 的 細 胞 數 量 大 , 因 此 其 反 映 群 體 細 胞 的 凋 亡 狀 態 比 較 準 確 2 ) 、 可 以 做 許 多 相 關 性 分 析 3 ) 、 結 合 被 檢 測 細 胞 的 D N A 含 量 的 分 析 , 可 確 定 凋 亡 的 細 胞 所 處 的 細 胞 周 期 檢 測 形 態 學 及 細 胞 膜 完 整 性 的 H o e c h s P I 雙 染 色 法 細 胞 發 生 凋 亡 時 , 其 細 胞 膜 的 通 透 性 液 增 加 , 但 其 程 度 介 于 正 常 細 胞 和 壞 死 細 胞 之 間 , 利 用 這 一 特 點 , 被 檢 測 細 胞 懸 液 用 熒 光 素 染 色 , 利 用 流 式 細 胞 儀 檢 測 細 胞 懸 液 中 細 胞 熒 光 強 度 來 區 分 正 常 細 胞 、 壞 死 細 胞 和 凋 亡 細 胞 。 D N A 片 斷 原 位 標 記 法 凋 亡 細 胞 D N A 片 斷 原 位 末 端 檢 測 技 術 是 指 在 細 胞 ( 或 組 織 ) 結 構 保 持 不 變 的 情 況 下 , 用 熒 光 素 、 生 物 素 標 記 的 脫 氧 尿 三 磷 酸 ( d e o x y u r i d i n e t r i p h a t e , D U T P ) 和 末 端 脫 氧 核 苷 酸 轉 移 酶 ( T d T ) 相 反 應 與 凋 亡 細 胞 裂 解 后 3 · 的 羥 基 ( - O H ) 端 結 合 , 經 顯 色 反 應 后 檢 測 D N A 裂 解 點 的 技 術 。 D N A 片 段 原 位 標 記 法 有 二 種 : 1 、 原 位 缺 口 轉 移 ( i n s i t u n i c k t r a n s l a t i o n , I S N T ) 技 術 , 它 是 利 用 D N A 多 聚 酶 I 將 標 記 的 核 苷 酸 連 接 到 斷 裂 D N A 的 3 · - O H 端 2 、 原 位 缺 口 末 端 標 記 技 術 ( i n s i t u e n d l a b e l l i n g t e c h n i q u e , I S E L ) , 即 T U N E L 法 , 它 是 利 用 T d T 將 標 記 的 D U P T 接 到 3 · O H 端 。 研 究 證 明 , T U N E L 法 的 敏 感 性 遠 高 于 I S N T , 尤 其 對 早 期 凋 亡 的 檢 測 , T U N E L 更 為 合 適 。 檢 測 細 胞 膜 成 分 變 化 的 A n n e x i n V 聯 合 P I 法 : 1 、 原 理 : 在 細 胞 凋 亡 早 期 位 于 細 胞 膜 內 側 的 磷 脂 酰 絲 氨 酸 ( P S ) 遷 移 至 細 胞 膜 外 測 。 磷 脂 結 合 蛋 白 V ( A n n e x i n V ) 是 一 種 鈣 依 賴 性 的 磷 脂 結 合 蛋 白 , 它 于 P S 具 有 高 度 的 結 合 力 。 因 此 , A n n e x i n V 可 以 作 為 探 針 檢 測 暴 露 在 細 胞 外 測 的 磷 脂 酰 絲 氨 酸 。 故 利 用 對 P S 有 高 度 親 和 力 的 A n n e x i n V , 將 A n n e x i n V 標 記 上 熒 光 素 ( 如 異 硫 氰 酸 熒 光 素 F I T C ) , 同 時 結 合 使 用 P I 拒 染 法 ( 因 壞 死 細 胞 P S 亦 暴 露 于 細 胞 膜 外 測 , 且 對 P I 高 染 ) 進 行 凋 亡 細 胞 雙 染 法 后 用 流 式 細 胞 儀 即 可 檢 測 凋 亡 細 胞 。 2 、 結 果 判 斷 : 正 常 活 細 胞 A n n e x i n V 、 P I 均 低 染 ; 凋 亡 細 胞 A n n e x i n V 高 染 、 P I 低 染 ; 壞 死 細 胞 A n n e x i n V / P I 均 高 染 。 3 、 應 用 價 值 : 細 胞 發 生 凋 亡 時 , 膜 上 的 P S 外 露 早 于 D N A 斷 裂 發 生 , 因 此 A n n e x i n V 聯 合 P I 染 色 法 檢 測 早 期 細 胞 凋 亡 較 T U N E L 法 更 為 靈 敏 。 又 A n n e x i n V 聯 合 P I 染 色 不 需 固 定 細 胞 , 可 避 免 P I 染 色 因 固 定 造 成 的 細 胞 碎 片 過 多 及 T U N E L 法 因 固 定 出 現 的 D N A 片 段 丟 失 。 . . . 查 看 詳 細 方 案 > > 總 結 E L I S A 加 樣 方 法 技 巧 在 E L I S A 中 除 了 包 被 外 , 一 般 需 進 行 4 5 次 加 樣 。 在 定 性 測 定 中 有 時 不 強 調 加 樣 量 的 準 確 性 , 例 如 規 定 為 加 樣 一 滴 。 此 時 應 該 使 用 相 同 口 徑 的 滴 管 , 保 持 準 確 的 加 樣 姿 勢 , 使 每 滴 液 體 的 體 積 基 本 相 同 。 在 定 量 測 定 中 則 加 樣 量 應 力 求 準 確 。 標 本 和 結 合 物 的 稀 釋 液 應 按 規 定 配 制 。 加 樣 時 應 將 液 體 加 在 孔 底 , 避 免 加 在 孔 壁 上 部 , 并 注 意 不 可 出 現 氣 泡 。 E L I S A 中 加 樣 須 注 意 如 下 問 題 : 1 . 吸 取 樣 品 時 , 加 樣 槍 吸 頭 不 應 黏 附 多 余 的 液 體 ; 加 樣 時 不 可 9 0 度 向 孔 中 滴 加 液 體 , 這 樣 會 導 致 液 體 殘 留 在 吸 頭 上 , 加 樣 不 準 確 ! 2 . 不 要 將 吸 頭 伸 入 孔 中 , 一 方 面 若 接 觸 孔 底 可 能 壓 彎 吸 頭 , 另 一 方 面 可 能 會 將 孔 中 的 液 體 吹 起 來 , 加 樣 不 準 確 ! 正 確 的 加 樣 方 法 應 為 4 5 度 , 吸 頭 貼 著 孔 壁 加 入 , 應 注 意 : 1 . 角 度 太 小 , 會 使 液 體 殘 留 在 孔 壁 上 , 導 致 加 樣 不 準 確 ! 2 . 吸 頭 應 當 貼 著 管 壁 和 液 面 的 交 界 處 。 . . . 查 看 詳 細 方 案 > > E L I S A 試 劑 盒 的 測 試 要 求 在 E L I S A 中 , 進 行 各 項 實 驗 條 件 的 選 擇 是 很 重 要 的 , 其 中 包 括 : ( 1 ) 固 相 載 體 的 選 擇 : 許 多 物 質 可 作 為 固 相 載 體 , 如 聚 氯 乙 烯 、 聚 苯 乙 烯 、 聚 丙 酰 胺 和 纖 維 素 等 。 其 形 式 可 以 是 凹 孔 平 板 、 試 管 、 珠 粒 等 。 目 前 常 用 的 是 4 0 孔 聚 苯 乙 烯 凹 孔 板 。 不 管 何 種 載 體 , 在 使 用 前 均 可 進 行 篩 選 : 用 等 量 抗 原 包 被 , 在 同 一 實 驗 條 件 下 進 行 反 應 , 觀 察 其 顯 色 反 應 是 否 均 一 性 , 據 此 判 明 其 吸 附 性 能 是 否 良 好 。 ( 2 ) 包 被 抗 體 ( 或 抗 原 ) 的 選 擇 : 將 抗 體 ( 或 抗 原 ) 吸 附 在 固 相 載 體 表 面 時 , 要 求 純 度 要 好 , 吸 附 時 一 般 要 求 P H 在 9 . 0 ~ 9 . 6 之 間 。 吸 附 溫 度 , 時 間 及 其 蛋 白 量 也 有 一 定 影 響 , 一 般 多 采 用 4 ℃ 1 8 ~ 2 4 小 時 。 蛋 白 質 包 被 的 適 合 濃 度 需 進 行 滴 定 : 即 用 不 同 的 蛋 白 質 濃 度 ( 0 . 1 、 1 . 0 和 1 0 μ g / m l 等 ) 進 行 包 被 后 , 在 其 它 試 驗 條 件 相 同 時 , 觀 察 陽 性 標 本 的 O D 值 。 選 擇 O D 值 大 而 蛋 白 量 少 的 濃 度 。 對 于 多 數 蛋 白 質 來 說 通 常 為 1 ~ 1 0 μ g / m l 。 ( 3 ) 酶 標 記 抗 體 工 作 濃 度 的 選 擇 : 首 先 用 直 接 E L I S A 法 進 行 初 步 效 價 的 滴 定 ( 見 酶 標 記 抗 體 部 份 ) 。 然 后 再 固 定 其 它 條 件 或 采 取 “ 方 陣 法 ( 包 被 物 、 待 檢 樣 品 的 參 考 品 及 酶 標 記 抗 體 分 別 為 不 同 的 稀 釋 度 ) 在 正 式 實 驗 系 統 里 準 確 地 滴 定 其 工 作 濃 度 。 ( 4 ) 酶 的 底 物 及 供 氫 體 的 選 擇 : 對 供 氫 體 的 選 擇 要 求 是 價 廉 、 安 全 、 有 明 顯 地 顯 色 反 應 , 而 本 身 無 色 。 有 些 供 氫 體 ( 如 O P D 等 ) 有 潛 在 的 致 癌 作 用 , 應 注 意 防 護 。 有 條 件 者 應 使 用 不 致 癌 、 靈 敏 度 高 的 供 氫 體 , 如 T M B 和 A B T S 是 目 前 較 為 滿 意 的 供 氫 體 。 底 物 作 用 一 段 時 間 后 , 應 加 入 強 酸 或 強 堿 以 終 止 反 應 。 通 常 底 物 作 用 時 間 , 以 1 0 3 0 分 鐘 為 宜 。 底 物 使 用 液 需 要 新 鮮 配 制 , 尤 其 是 H 2 O 2 在 臨 用 前 加 入 。 . . . 查 看 詳 細 方 案 > > 如 何 保 證 E L I S A 試 劑 盒 的 產 品 質 量 和 使 用 質 量 對 于 實 驗 室 科 研 工 作 者 來 說 , 產 品 的 質 量 是 廣 大 實 驗 者 非 常 關 注 的 一 個 重 要 問 題 , 這 是 影 響 實 驗 結 果 的 一 大 因 素 。 產 品 質 量 來 源 于 生 產 廠 家 , 實 驗 的 質 量 就 是 與 實 驗 操 作 者 有 很 大 的 關 系 了 , 那 么 如 何 保 證 E L I S A 試 劑 盒 的 產 品 質 量 與 使 用 質 量 。 E L I S A 試 劑 盒 診 斷 試 劑 經 歷 了 從 合 成 肽 向 工 程 抗 原 的 過 渡 。 由 于 歷 史 的 原 因 , 人 們 往 往 以 反 應 本 底 的 好 壞 來 衡 量 E L I S A 反 應 試 劑 盒 , 酶 免 E L I S A 試 劑 盒 , 其 產 品 質 量 優 勢 表 現 在 : 1 . 潔 凈 的 生 產 環 境 及 科 學 的 生 產 操 控 規 程 , 保 證 了 每 個 品 種 不 同 批 次 產 品 質 量 的 穩 定 性 。 2 . 原 料 : 我 公 司 采 用 品 質 有 保 證 的 試 劑 盒 生 產 商 的 抗 體 作 為 原 料 。 我 們 的 其 它 輔 料 除 一 些 鹽 外 , 其 余 生 物 活 性 原 料 均 為 原 裝 。 與 其 它 生 產 商 相 比 , 檢 測 抗 體 和 H R P 酶 我 公 司 產 品 中 提 供 直 接 的 稀 釋 液 , 直 接 加 樣 , 免 去 了 客 戶 自 己 從 高 濃 度 向 低 濃 度 稀 釋 ; 底 物 部 分 , 我 公 司 E L I S A 試 劑 盒 產 品 中 配 置 進 口 單 組 分 T M B , 免 去 客 戶 用 雙 組 分 時 用 前 的 混 合 步 驟 。 我 公 司 提 供 的 E L I S A 試 劑 盒 樣 本 稀 釋 液 可 有 效 消 除 血 清 中 某 些 成 份 的 影 響 , 準 確 度 高 。 板 內 誤 差 和 板 間 誤 差 在 5 % 之 內 。 酶 免 E L I S A 提 醒 您 : 保 證 實 驗 質 量 , 您 需 注 意 的 事 項 有 : 1 . 合 理 安 排 檢 測 量 , 以 免 反 應 板 過 多 造 成 洗 板 等 待 時 間 長 。 2 . 顯 色 劑 盡 量 在 臨 用 前 配 制 , 堅 持 不 用 過 期 顯 色 劑 , 肉 眼 可 見 淺 藍 色 的 T M B 顯 色 劑 不 用 。 3 . 加 樣 時 保 持 顯 色 劑 不 外 流 ; A 、 B 液 應 避 免 接 觸 金 屬 器 械 。 加 終 止 液 時 應 避 免 產 生 氣 泡 。 4 . 加 酶 E L I S A 試 劑 盒 后 用 吸 水 紙 在 酶 標 板 表 面 輕 拭 吸 干 。 顯 色 和 比 色 在 E L I S A 試 劑 盒 實 驗 中 的 影 響 E L I S A 試 劑 盒 有 著 準 確 性 高 、 靈 敏 度 高 、 特 異 性 強 等 很 多 的 優 點 , 它 在 檢 測 抗 體 、 抗 原 等 方 面 有 很 好 的 應 用 , 深 受 廣 大 用 戶 朋 友 的 喜 愛 。 然 而 , 在 實 驗 過 程 中 , 也 需 要 注 意 很 多 問 題 , 特 別 是 顯 色 、 比 色 問 題 。 E L I S A 知 識 要 點 顯 色 和 比 色 分 析 ? : 顯 色 ? 顯 色 是 E L I S A 中 的 后 一 步 溫 育 反 應 , 此 時 酶 催 化 無 色 的 底 物 生 成 有 色 的 產 物 。 反 應 的 溫 度 和 時 間 仍 是 影 響 顯 色 的 因 素 。 在 規 定 時 間 內 , 陰 性 孔 可 保 持 無 色 , 而 陽 性 孔 則 隨 時 間 的 延 長 而 呈 色 加 強 。 適 當 提 高 溫 度 有 助 于 加 速 顯 色 進 行 。 在 定 量 測 定 中 , 加 入 底 物 后 的 反 應 溫 度 和 時 間 應 按 規 定 力 求 準 確 。 定 性 測 定 的 顯 色 可 在 室 溫 進 行 , 時 間 一 般 不 需 要 嚴 格 控 制 , 有 時 可 根 據 陽 性 對 照 孔 和 陰 性 對 照 孔 的 顯 色 情 況 適 當 縮 短 或 延 長 反 應 時 間 , 及 時 判 斷 。 O P D ( 鄰 苯 二 胺 ) 底 物 顯 色 一 般 在 室 外 溫 或 3 7 ℃ 反 應 2 0 3 0 分 鐘 后 即 不 再 加 深 , 再 延 長 反 應 時 間 , 可 使 本 底 值 增 高 。 O P D 底 物 液 受 光 照 會 自 行 變 色 , 顯 色 反 應 應 避 光 進 行 , E L I S A 試 劑 盒 顯 色 反 應 結 束 時 加 入 終 止 液 終 止 反 應 。 O P D 產 物 用 硫 酸 終 止 后 , 顯 色 由 橙 黃 色 轉 向 棕 黃 色 。 T M B ( 四 甲 基 聯 苯 胺 ) 受 光 照 的 影 響 不 大 , 可 在 室 溫 中 置 于 操 作 臺 上 , 邊 反 應 觀 察 結 果 。 但 為 保 證 實 驗 結 果 的 穩 定 性 , 宜 在 規 定 的 適 當 時 間 閱 讀 結 果 。 T M B 經 H R P 作 用 后 , 約 4 0 分 鐘 顯 色 達 頂 峰 , 隨 即 逐 漸 減 弱 , 至 2 小 時 后 即 可 完 全 消 退 至 無 色 。 T M B 的 終 止 液 有 多 種 , 疊 氮 鈉 和 十 二 烷 基 硫 酸 鈉 ( S D S ) 等 酶 抑 制 劑 均 可 使 反 應 終 止 。 這 類 終 止 劑 尚 能 使 藍 色 維 持 較 長 時 間 ( 1 2 2 4 小 時 ) 不 褪 , 是 目 視 判 斷 的 良 好 終 止 劑 。 此 外 , 各 類 酸 性 終 止 液 則 會 使 藍 色 轉 變 成 黃 色 , 此 時 可 用 特 定 的 波 長 ( 4 5 0 n m ) 測 讀 吸 光 值 。 比 色 ? 比 色 前 應 先 用 潔 凈 的 吸 水 紙 拭 干 板 底 附 著 的 液 體 , 然 后 將 板 正 確 放 入 酶 標 比 色 儀 的 比 色 架 中 。 以 軟 板 為 載 體 的 試 驗 , 需 先 將 板 置 于 標 準 9 6 孔 的 座 架 中 , 才 可 進 行 比 色 。 在 加 底 物 液 顯 色 前 , 先 將 軟 板 邊 緣 剪 凈 , 這 樣 , 此 板 就 可 完 全 平 妥 坐 入 座 架 中 。 比 色 時 應 先 以 蒸 餾 水 校 零 點 , 測 讀 底 物 孔 ( 未 經 任 何 反 應 僅 加 底 物 液 的 孔 ) 和 空 白 孔 ( 以 生 理 鹽 水 或 稀 釋 液 代 替 標 本 作 全 過 程 的 孔 ) , 以 記 錄 本 次 試 驗 的 試 劑 狀 況 。 其 后 可 用 空 白 孔 以 蒸 餾 水 校 零 點 , 以 上 各 孔 的 吸 光 度 需 減 去 空 白 孔 的 吸 光 度 , 然 后 進 行 計 算 。 比 色 結 果 的 表 達 以 往 通 用 光 密 度 ( o p l i c a l d e n s i t y , O D ) , 現 按 規 定 用 吸 光 度 ( a b s o r b e n c e , A ) , 兩 者 含 義 相 同 。 通 常 的 表 示 方 法 是 , 將 吸 收 波 長 寫 于 A 字 母 的 右 下 角 , 如 O P D 的 吸 收 波 長 為 4 9 2 n m , 表 示 方 法 為 “ A 4 9 2 n m 或 “ O D 4 9 2 n m 。 酶 標 比 色 儀 酶 標 比 色 儀 簡 稱 酶 標 儀 , 通 常 指 專 用 于 測 讀 E L I S A 結 果 吸 光 度 的 光 度 計 。 針 對 固 相 載 體 形 式 的 不 同 , 各 有 特 制 的 適 用 于 板 、 珠 和 小 試 管 的 設 計 。 許 多 試 劑 公 司 配 套 供 應 酶 標 儀 。 酶 標 儀 的 主 要 性 能 指 標 有 : 測 讀 速 度 、 讀 數 的 準 確 性 、 重 復 性 、 精 確 度 和 可 測 范 圍 、 線 性 等 等 。 優 良 的 酶 標 儀 的 讀 數 一 般 可 精 確 到 0 . 0 0 1 , 準 確 性 為 ± 1 % , 重 復 性 達 0 . 5 % 。 舉 例 說 , 若 某 孔 測 得 的 A 值 為 1 . 0 8 3 , 則 該 孔 相 對 于 空 氣 的 真 實 A 值 應 為 1 . 0 8 3 ± 0 . 0 1 ( 1 . 0 7 3 ~ 1 . 0 9 3 ) , 重 復 測 定 數 次 , 其 A 值 均 應 1 . 0 8 3 ± 0 . 0 5 ( 1 . 0 7 8 ~ 1 . 0 8 8 ) 在 之 間 。 酶 標 儀 的 可 測 范 圍 視 各 酶 標 儀 的 性 能 而 不 同 。 普 通 的 酶 標 儀 在 0 . 0 0 0 ~ 2 . 0 0 0 , 新 型 號 的 酶 標 儀 上 限 拓 寬 達 2 . 9 0 0 , 甚 至 更 高 。 超 出 可 測 上 限 的 A 值 常 以 “ * 或 “ o v e r 或 其 它 符 號 表 示 。 應 注 意 可 測 范 圍 與 線 性 范 圍 的 不 同 , 線 性 范 圍 常 小 于 可 測 范 圍 , 比 如 某 一 酶 標 儀 的 可 測 范 圍 為 0 . 0 0 0 ~ 2 . 9 0 0 , 而 其 線 性 范 圍 僅 0 . 0 0 0 ~ 2 . 0 0 0 , 這 在 定 量 E L I S A 中 制 作 標 準 曲 線 時 應 予 注 意 。 酶 標 儀 不 應 安 置 在 陽 光 或 強 光 照 射 下 , 操 作 時 室 溫 宜 在 1 5 3 0 ℃ , 使 用 前 先 預 熱 儀 器 1 5 3 0 分 鐘 , 測 讀 結 果 更 穩 定 。 測 讀 A 值 時 , 要 選 用 產 物 的 敏 感 吸 收 峰 , 如 O P D 用 4 9 2 n m 波 長 。 E L I S A 試 劑 盒 有 的 酶 標 儀 可 用 雙 波 長 式 測 讀 , 即 每 孔 先 后 測 讀 兩 次 , 首 先 一 次 在 最 適 波 長 ( W 1 ) , 然 后 二 次 在 不 敏 感 波 長 ( W 2 ) , 兩 次 測 定 間 不 移 動 E L I S A 板 的 位 置 。 例 如 O P D 用 4 9 2 n m 為 W 1 , 6 3 0 n m 為 W 2 , 最 終 測 得 的 A 值 為 兩 者 之 差 ( W 1 W 2 ) 。 雙 波 長 式 測 讀 可 減 少 由 容 器 上 的 劃 痕 或 指 印 等 造 成 的 光 干 擾 。 P e p r o T e c h 細 胞 因 子 溶 解 / 儲 存 和 分 裝 方 法 P e p r o T e c h 細 胞 因 子 中 不 含 載 體 蛋 白 ( C a r r i e r P r o t e i n ) 或 其 他 添 加 劑 ( 如 B S A 、 H A S 或 蔗 糖 等 ) , 并 且 通 常 以 少 量 的 鹽 來 進 行 凍 干 處 理 , 因 此 微 量 的 細 胞 因 子 在 凍 干 過 程 中 會 沉 積 于 管 內 , 形 成 很 薄 或 不 可 見 的 蛋 白 層 。 所 以 我 們 建 議 在 收 到 產 品 后 , 務 必 在 開 蓋 前 先 離 心 , 使 粘 在 管 蓋 或 管 壁 上 的 蛋 白 聚 集 于 管 底 ( 此 時 能 否 見 到 白 色 沉 淀 均 屬 正 常 現 象 ) 。 1 . 離 心 : 高 速 離 心 ( 1 0 , 0 0 0 r p m ) 2 0 3 0 秒 , 或 低 速 離 心 ( 2 , 0 0 0 r p m ) 5 分 鐘 。 ? ? 2 . 溶 解 ( R e c o n s t i t u t i o n ) : 用 去 離 子 水 或 其 它 緩 沖 液 ( 根 據 說 明 書 要 求 進 行 選 擇 ) 溶 解 至 說 明 書 要 求 的 濃 度 ( 一 般 為 0 . 1 1 . 0 m g / m L , 如 1 0 u g 的 產 品 , 需 用 1 0 u L 1 0 0 u L 的 去 離 子 水 或 緩 沖 液 溶 解 ) 。 溶 解 時 不 可 振 蕩 , 避 免 因 化 學 鍵 的 斷 裂 造 成 蛋 白 失 活 , 可 加 入 適 當 的 溶 劑 輕 搖 并 靜 置 一 段 時 間 , 待 細 胞 因 子 完 全 溶 解 后 使 用 。 溶 劑 的 選 擇 : ? ? 1 ) 要 求 用 去 離 子 水 溶 解 的 產 品 , 務 必 不 可 用 鹽 溶 液 , 避 免 過 高 的 鹽 濃 度 造 成 蛋 白 不 可 逆 的 析 出 ; ? ? 2 ) 要 求 用 鹽 溶 液 溶 解 的 產 品 , 請 依 照 說 明 書 上 的 濃 度 , 同 樣 也 是 為 了 避 免 過 高 的 鹽 濃 度 。 ? ? 3 . 分 裝 和 貯 存 ( A l i q u o t a n d S t o r a g e ) : 蛋 白 溶 解 后 可 根 據 自 己 的 實 驗 需 要 進 一 步 稀 釋 成 工 作 液 , 稀 釋 可 用 R P M I 1 6 4 0 、 D M E M 或 P B S 等 溶 液 , 其 中 應 該 含 有 5 1 0 % 的 F C S ( 小 牛 血 清 或 胎 牛 血 清 ) 或 0 . 5 % 的 B S A ( 牛 血 清 白 蛋 白 ) 來 穩 定 蛋 白 。 工 作 液 在 4 ℃ 可 保 存 1 周 , 如 需 長 期 保 存 , 則 需 分 裝 凍 存 于 2 0 ℃ ( 注 意 : 不 可 凍 存 于 8 0 ℃ ) 。 分 裝 時 每 管 中 工 作 液 的 體 積 應 該 是 一 次 實 驗 的 用 量 , 以 實 現 每 次 實 驗 用 完 一 只 工 作 液 , 避 免 反 復 凍 融 引 起 蛋 白 活 性 的 降 低 。 公 司 新 聞 技 術 中 心 【 重 要 】 關 于 酶 免 L O G O 變 更 通 知 2 0 2 2 0 7 1 5 喜 迎 國 慶 | 2 0 2 4 年 酶 免 國 慶 節 放 假 通 知 2 0 2 4 0 9 2 4 “ 酶 免 ” 品 牌 E L I S A 試 劑 盒 打 假 聲 明 2 0 2 0 0 5 2 7 關 于 酶 免 E L I S A 試 劑 盒 包 裝 升 級 公 告 2 0 1 8 1 0 3 0 酶 免 啟 用 雙 重 防 偽 通 知 ! 2 0 1 8 1 0 2 4 E L I S A 試 劑 盒 的 注 意 事 項 2 0 2 4 0 9 3 0 抗 體 和 抗 原 的 區 別 2 0 2 4 0 8 2 3 一 篇 文 章 讓 你 了 解 什 么 是 E L I S A 方 法 學 2 0 2 4 0 7 3 1 關 于 我 們 更 多 > > 關 于 我 們 企 業 簡 介 企 業 文 化 聯 系 我 們 新 手 指 南 用 戶 注 冊 購 物 流 程 配 送 方 式 上 門 自 提 快 遞 運 輸 關 注 酶 免 公 眾 號 關 注 酶 免 新 浪 微 博 支 付 方 式 在 線 支 付 貨 到 付 款 公 司 轉 賬 售 后 服 務 售 后 政 策 換 貨 政 策 取 消 訂 單 售 后 服 務 會 員 政 策 會 員 積 分 積 分 兌 換 用 戶 協 議 首 頁 | 新 聞 資 訊 | 產 品 中 心 | 客 戶 服 務 | 技 術 中 心 | 關 于 我 們 C o p y R i g h t 酶 免 試 劑 盒 商 城 w w w . m m b i o . c n . 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長城網是長城新媒體集團的門戶網站,河北省級主流媒體,第一網絡媒體,是國新辦批準成立的具有新聞登載資質的省級重點新聞網站之一,長城網基本定位為權威媒體,政務平臺,民生網站,提供河北及各地新聞熱點,時政要聞,媒體熱評和官方報道等資訊信息,通過冀云·融媒體平臺構建起“新聞+政務服務商務”的融媒體內容生產和傳播應用體系.

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新鄉市殘聯

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隨機文章
掌握 C++ 中的迭代器:基礎、分類和高級用法 (掌握c++中函數的實驗目的)

掌握 C++ 中的迭代器:基礎、分類和高級用法 (掌握c++中函數的實驗目的)

引言迭代器是C,標準庫中強大的工具,用于遍歷容器和數據結構,它們提供了統一且高效的界面來訪問和操作集合中的元素,無論底層數據結構如何,基礎定義,迭代器是一種類型化的指針,指向集合中的元素,操作,迭代器可以進行遞增和遞減操作,允許向前或向后遍歷集合,解引用,使用運算符可以解引用迭代器,獲得其所指向的元素值,分類根據指向元素的位置,迭代...。

互聯網資訊 2024-09-27 12:07:07

用Getresources的力量點亮您的職業道路 (用getreadytodosth造句)

用Getresources的力量點亮您的職業道路 (用getreadytodosth造句)

Getresources是一個強大的在線職業發展平臺,致力于幫助求職者和專業人士在職業道路上取得成功,通過提供廣泛的資源和工具,Getresources賦能個人超越界限,實現他們的職業目標,Getresources提供的資源職業評估,幫助您了解自己的優勢、技能和興趣,從而找到與您理想職業相匹配的途徑,職業規劃,提供量身定制的職業規劃指...。

互聯網資訊 2024-09-23 22:46:20

定制化:您可以根據社區的特定需求定制插件,輕松實現想要的論壇功能。(定制化ui)

定制化:您可以根據社區的特定需求定制插件,輕松實現想要的論壇功能。(定制化ui)

引言論壇插件是論壇軟件中強大的工具,它可以極大地擴展論壇的功能并增強用戶體驗,但是,現成的插件可能并不總是滿足每個社區的具體需求,這就是定制化發揮作用的地方,定制化的好處定制化論壇插件可以提供以下好處,滿足社區需求,您可以根據社區的特定要求定制插件,實現想要的論壇功能,定制化過程論壇插件的定制化過程通常涉及以下步驟,確定需求,明確您希...。

本站公告 2024-09-23 20:47:11

考慮品牌識別:選擇與品牌標識相符的字體。獨特而令人難忘的字體可以幫助建立品牌知名度。(考慮品牌識別的因素)

考慮品牌識別:選擇與品牌標識相符的字體。獨特而令人難忘的字體可以幫助建立品牌知名度。(考慮品牌識別的因素)

考慮品牌識別,選擇與品牌標識相符的字體導言字體是視覺交流中不容忽視的重要元素,它不僅傳達文字信息,還向受眾傳達品牌的個性、價值觀和整體形象,在選擇字體時,考慮品牌識別至關重要,以確保字體與品牌標識保持一致并增強品牌的知名度,品牌識別因素品牌識別是一個多方面的概念,由以下因素組成,品牌名稱,品牌名稱代表企業的身份,品牌標志,品牌標志是品...。

本站公告 2024-09-23 04:07:00

有害物質的陷阱:識別和避免日常生活中的有害物質 (有害物質的陷阱有哪些)

有害物質的陷阱:識別和避免日常生活中的有害物質 (有害物質的陷阱有哪些)

有害物質的陷阱,識別和避免日常生活中的有害物質在現代社會,我們每天都會接觸到許多有害物質,這些物質可能潛伏在我們日常使用的產品、食物和環境中,如果不注意,它們可能會對我們的健康造成嚴重損害,因此,至關重要的是,我們要能夠識別和避免這些有害物質,常見有害物質1.殺蟲劑殺蟲劑是用于控制害蟲的化學物質,它們通常用于農業、家庭和商業場所,一些...。

技術教程 2024-09-16 09:12:38

揭秘 CSS 選擇器:提高前端開發效率的必備技能 (css 選擇)

揭秘 CSS 選擇器:提高前端開發效率的必備技能 (css 選擇)

引言作為前端開發人員,CSS選擇器是必備技能,通過熟練掌握CSS選擇器,您可以大幅提高代碼的效率和可維護性,本文將深入探討CSS選擇器的本質,揭秘其強大的功能和用法技巧,幫助您成為一名更出色的前端開發人員,什么是CSS選擇器,CSS選擇器是一種模式,用于從HTML文檔中挑選特定的HTML元素,它允許您為選定的元素應用樣式,從而控制它們...。

互聯網資訊 2024-09-16 02:56:37

部署后支持:提供持續支持以解決部署后出現的任何問題或請求。(部署完成后可在什么發揮作用)

部署后支持:提供持續支持以解決部署后出現的任何問題或請求。(部署完成后可在什么發揮作用)

03cli>,需要滿足特定行業或法規的合規性要求,選擇部署后支持提供商在選擇部署后支持提供商時,應考慮以下因素,經驗和專業知識,選擇具有相關行業經驗和專業技術技能的提供商,服務水平協議,SLA,確保提供商提供明確的服務水平協議,規定響應時間、可用性和支持范圍,成本,考慮部署后支持服務的成本,并將其與預期的收益進行比較,溝通和可訪...。

本站公告 2024-09-14 06:15:48

踏上h5游戲開發之路:H5游戲平臺源碼的入門指南

踏上h5游戲開發之路:H5游戲平臺源碼的入門指南

引言隨著HTML5技術的不斷發展,H5游戲憑借其跨平臺、無需安裝的特點,逐漸成為游戲開發領域的新寵,本文將為初學者提供一份H5游戲平臺源碼的入門指南,幫助大家踏上H5游戲開發之旅,H5游戲平臺源碼概述H5游戲平臺源碼是一個完整的H5游戲開發框架,可以幫助開發者快速搭建和發布H5游戲,它通常包括游戲引擎、渲染引擎、物理引擎、網絡引擎等組...。

技術教程 2024-09-11 09:44:33

掌握關系數據庫:SQL 基礎、表設計和數據操作 (掌握關系數據庫中三種基礎類型特點)

掌握關系數據庫:SQL 基礎、表設計和數據操作 (掌握關系數據庫中三種基礎類型特點)

SQL基礎什么是SQL,SQL,StructuredQueryLanguage,結構化查詢語言,是一種用于與關系數據庫進行交互的標準語言,SQL的組成部分,SQL由以下主要部分組成,數據定義語言,DDL,用于創建和修改數據庫結構,數據操縱語言,DML,用于插入、更新和刪除數據,數據查詢語言,DQL,用于檢索數據,表設計什么是表,...。

技術教程 2024-09-10 02:34:35

MVC 架構:分離模型 (M)、視圖 (V) 和控制器 (C),提高代碼的可維護性和可擴展性。(mvc架構模式)

MVC 架構:分離模型 (M)、視圖 (V) 和控制器 (C),提高代碼的可維護性和可擴展性。(mvc架構模式)

簡介MVC架構模式,Model,View,Controller,是一種軟件設計模式,它將應用程序的業務邏輯,模型,、用戶界面,視圖,和業務邏輯與用戶界面之間的交互,控制器,分離,這種分離提高了代碼的可維護性和可擴展性,組件MVC架構模式由三個主要組件組成,模型,M,負責應用程序的業務邏輯,它管理和操作應用程序的數據,視圖,V,負責...。

技術教程 2024-09-07 23:26:39

滲透的恐懼:加油站內的鬼魂附身經歷 (滲透講的是什么)

滲透的恐懼:加油站內的鬼魂附身經歷 (滲透講的是什么)

滲透的恐懼,加油站內的鬼魂附身經歷導言在現代社會中,人們通常將超自然事件歸類為迷信或神話,但是,一些令人毛骨悚然的經歷挑戰了我們的認知,引發了我們對未知的恐懼,以下是一個關于一個加油站內鬼魂附身經歷的真實故事,它將讓你不寒而栗,加油站內的怪異現象故事發生在一個偏僻的加油站,這個加油站一直以來都以其詭異的氛圍而聞名,工作人員經常報告說聽...。

互聯網資訊 2024-09-04 00:22:09

新建設的網站要如何進行SEO優化 (新建設的網站叫什么)

新建設的網站要如何進行SEO優化 (新建設的網站叫什么)

有很多新建設的網站不知道要如何來進行SEO優化,首先肯定是要對網站有一個清楚的定位,比如說網站建設號之后的目的是什么,可以為用戶提供哪些服務等等,下面就來詳細了解一下新建設的網站要如何進行SEO優化,一、選擇好的域名、服務器1、域名不見得一定要選擇老域名,新域名也是可以的,因為就算你用的是一個有十多年的老域名,但是你自己沒有在優化方面...。

技術教程 2024-09-02 00:08:37

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